Beschreibung
Gebrauchsanweisung des Chlorpyrifos (CPF) Enzyme-Linked Immunoassay (ELISA) Kit
Dieses Kit ist nur für Forschungszwecke bestimmt.
1 Verwendungszweck:
Dieses Kit wird zum quantitativen Nachweis von Chlorpyrifos (CPF)-Rückständen in Futter-, Fisch-, Garnelen- und Fleischgeweben (wie Huhn, Rind und Schwein), Eiern, Honig, Milch, Serum und Urinproben verwendet.
2 Versuchsprinzip
Dieses Kit verwendet die kompetitive ELISA-Methode. Die Mikrotiterplatte wird mit Chlorpyrifos (CPF)-gekoppeltem Antigen beschichtet, und Chlorpyrifos (CPF)-Standards oder -Proben werden hinzugefügt, freies Chlorpyrifos (CPF) und Chlorpyrifos (CPF) sind auf dem Mikrotiterstreifen vorbeschichtet ) Kopplungsantigene konkurrieren miteinander um Anti -Chlorpyrifos (CPF) Antikörper-Enzymmarker. Verwenden Sie TMB-Substrat, um die Farbe zu entwickeln. Nach Zugabe der Stopplösung ändert sich die Farbe von blau nach gelb. Verwenden Sie einen Mikroplattenleser, um bei einer Wellenlänge von 450 nm zu erkennen. Die Extinktion ist die gleiche wie die der Probe. Der Gehalt an Chlorpyrifos (CPF) ist umgekehrt proportional und der Gehalt an Chlorpyrifos (CPF) in der Probe wird anhand der Standardkurve berechnet.
3 Kit-Zusammensetzung
3.1 Vorbeschichtete Chlorpyrifos (CPF) abnehmbare ELISA-Platte mit Antigen-konjugiert: 1 Stück (12 Wells × 8 Streifen).
3.2 Chlorpyrifos (CPF) Standard: 6 Flaschen (1ml/Flasche), Inhalt: 0 ppb, 0,1 ppb, 0,3 ppb, 0,9 ppb, 2,7 ppb, 8,1 ppb.
3.3 Anti-Chlorpyrifos (CPF) Antikörper-Enzym-Konjugat: 1 Flasche (6 ml).
3.4 Farbentwicklerlösung A: 1 Flasche (6 ml).
3.5 Farbentwicklungsflüssigkeit B: 1 Flasche (6 ml).
3.6 Stopplösung: 1 Flasche (6 ml), 2 M Schwefelsäure.
3.7 Probenverdünner: 1 Flasche (10×, 6ml), wird zur Probenverdünnung verwendet.
3.8 Konzentrierte Waschflüssigkeit: 1 Flasche (20×, 20 ml) zum Waschen der Platten.
3.9 Ein Merkblatt.
4 Benötigte, aber nicht bereitgestellte Materialien
4.1 Ausrüstung
4.1.1 Mikroplatten-Reader mit einer Wellenlänge von 450 nm.
4.1.2 Brecher.
4.1.3 Messzylinder.
4.1.4 Oszillator.
4.1.5 Trichter.
4.1.6 Whatman No 1 oder gleichwertiges Filterpapier. 4.1.7 Mikropipette.
4.2 Reagenzien
4.2.1 Entionisiertes Wasser oder destilliertes Wasser.
4.2.2 Methanol.
5 Speicher
5.1 Das Kit wird bei 2~8℃ gelagert, nicht einfrieren
5.2 Unbenutzte Mikrotiterplatten sollten verschlossen und trocken gelagert werden
6 Angelegenheiten, die Aufmerksamkeit erfordern
6.1 Bitte lesen Sie die Anweisungen sorgfältig durch, bevor Sie das Kit verwenden.
6.2 Verwenden Sie keine abgelaufenen Kits.
6.3 Bringen Sie die Reagenzien vor der Verwendung des Kits auf Raumtemperatur (25 ± 2 °C). Es wird empfohlen, für mindestens 2 Stunden auf die Temperatur zurückzukehren.
6.4 Das Standardprodukt enthält Chlorpyrifos (CPF), daher ist bei der Verwendung besondere Vorsicht geboten und während des Betriebs sollten Handschuhe getragen werden.
6.5 Die Stopplösung enthält Schwefelsäure, die Hautverbrennungen und Korrosion der Kleidung während des Gebrauchs verhindert.
6.6 Spitzen für verschiedene Standards und Proben können nicht gemischt werden, da sonst die Testergebnisse beeinflusst werden.
6.7 Die Reagenzien in den Kits verschiedener Chargennummern dürfen nicht gemischt werden; Die für verschiedene Standards und Proben verwendeten Spitzen dürfen nicht gemischt werden, da dies sonst die Versuchsergebnisse beeinflusst.
6.8 Das Probenverdünnungsmittel in diesem Kit muss zum Verdünnen der Probe verwendet werden, da es sonst die Versuchsergebnisse beeinflusst
6.9 Beim Mischen von Reagenzien sollte Schaumbildung vermieden werden.
7 Arbeitsflüssigkeit vorbereiten
7,1 Chlorpyrifos (CPF)-Standardlösung: 0 ppb, 0,1 ppb, 0,3 ppb, 0,9 ppb, 2,7 ppb, 8,1 ppb
7.2 Konzentrierte Waschflüssigkeit: 1:20 (1+19) mit destilliertem Wasser verdünnen
7.3 Probenverdünner: Zur Verwendung 1:10 (1+9) mit destilliertem Wasser verdünnen
7.3 Chromogener Wirkstoff: zurückhaltend, direktes Licht vermeiden
7.4 Reaktionsstopplösung: gebrauchsfertig
8 Probenverarbeitungsverfahren (Proben sollten während des Extraktionsprozesses streng nach den Anweisungen betrieben werden und der Extraktionsprozess sollte genau verdünnt werden, da sonst die Ergebnisse ungenau werden, die Proben sollten kühl und dunkel gelagert und gekühlt werden)
8.1 Nehmen Sie 10 g zerkleinerte Probe und fügen Sie 20 ml 70%ige Methanollösung hinzu
8.2 3 Minuten kräftig vibrieren
8.3 Filtern mit Whatman No 1 Filterpapier
8.4 Nehmen Sie 25 µl der verarbeiteten Probe und geben Sie 25 µl Probenverdünner in die Reaktionsvertiefung (der Probenverdünnungsfaktor beträgt 2)
9 Schritte des Enzymimmunoassays
9.1 Versuchsanleitung
9.1.1 Bitte bringen Sie alle Reagenzien außerhalb der Box vollständig auf Raumtemperatur (25 ± 2 °C), bevor das Experiment für etwa 2 Stunden beginnt. Nehmen Sie die mikroporösen Streifen nach dem Erwärmen auf Raumtemperatur (25±2) heraus, verschließen Sie die überschüssigen mikroporösen Streifen wieder und lagern Sie sie sofort bei 2~8℃
Hinweis: Stellen Sie sicher, dass die Temperaturrückführung ausreichend ist, da sonst die Genauigkeit und Genauigkeit der Erkennung beeinträchtigt werden.
9.1.2 Bitte stellen Sie das Reagenz sofort nach Gebrauch auf 2~8℃ zur Lagerung zurück
9.1.3 Bitte ändern Sie das Analyseprogramm nicht
9.1.4 Bitte verwenden Sie eine genaue Mikropipette
9.1.5 Nach dem Start des Vorgangs bitte kein Programm unterbrechen
9.1.6 Die Reproduzierbarkeit der ELISA-Ergebnisse hängt stark von den Arbeitsabläufen ab. Bitte halten Sie sich strikt an die Anforderungen
9.1.7 Um Kreuzkontaminationen zu vermeiden, muss jeder Standard
und Probe sollte mit verschiedenen Tipps gefüllt werden
9.1.8 Achten Sie darauf, dass die Pipettenspitze beim Hinzufügen von Proben nicht die Lösung oder die Innenfläche der Mikrotiterplatte berührt
9.2 Analyseschritte
9.2.1 Nummerierung im Voraus, Markierung der Position von B0, Standards und Proben, es wird empfohlen, eine Doppellochdetektion durchzuführen
9.2.2 Nehmen Sie die erforderliche Anzahl an Mikroporen (Mikroporenstreifen können entfernt werden), verschließen Sie die überschüssigen Streifen wieder und legen Sie sie sofort bei 2~8℃ zur Lagerung zurück
9.2.3 Probenverdünnungslösung (10x), konzentrierte Waschlösung (20x) werden in Arbeitslösung verdünnt (verdünnt mit destilliertem Wasser oder entionisiertem Wasser)
9.2.4 50µl 0,0 ppb Standardlösung in Well B0 . zugeben
9.2.5 50μl Standardlösung in jede Standardvertiefung geben
9.2.6 In jede Probenvertiefung 50 µl Probenlösung geben
9.2.7 50 µl Anti-Chlorpyrifos (CPF)-Antikörper-Enzym-Konjugat in alle Vertiefungen geben
9.2.8 Schütteln Sie die Reaktionsplatte einige Sekunden lang vorsichtig.
9.337℃ warmes Bad für 30 Minuten (durch gelegentliches Antippen der Reaktionsplatte während des warmen Bades kann der Doppellochfehler reduziert werden)
9.3.1 Flüssigkeit in den Wells abschütteln, Mikrotiterplatte 5-mal mit Lotion waschen und ein letztes Mal auf saugfähiges Papier klopfen, um die Flüssigkeit in den Wells vollständig zu entfernen.
9.4 Reaktion
9.4.1 Nach Abschluss des Waschvorgangs sofort mit einer Mikropipette 50 µl der chromogenen Lösung A und dann 50 µl der chromogenen Lösung B in jedes Mikrowell geben; Schütteln Sie die Reaktionsplatte leicht, um sie gründlich zu mischen
9.4.237℃ warmes Bad für 10min
9.4.3 50 µl Stopplösung in jedes Well geben und gut mischen
9.4.4 Ermitteln Sie die Extinktion bei 450 nm und lesen Sie das Ergebnis innerhalb von 5 Minuten ab.
10 Ergebnisberechnung
10.1 Quantitative Analyse
10.1.1 Der Durchschnittswert (B) des Extinktionswerts jeder erhaltenen Konzentrationsstandardlösung und Probe wird durch den Extinktionswert (B0) des ersten Standards (0 Standard) dividiert und dann mit 100 % multipliziert, was der prozentualen Extinktion entspricht Wert.
B – durchschnittlicher Extinktionswert der Standardlösung oder Probenlösung B0 – durchschnittlicher Extinktionswert von 0 μg/L Standardlösung
10.1.2 Zeichnen Sie mit dem logarithmischen Wert der Chlorpyrifos-Konzentration (CPF) auf der X-Achse und dem prozentualen Extinktionswert auf der Y-Achse eine Standardkurve. Entsprechend dem prozentualen Extinktionswert der Probe kann die Abszisse des entsprechenden Punktes aus der Kurve erhalten werden, die der Logarithmus der Konzentration von Chlorpyrifos (CPF) ist, und der Antilog wird als die Konzentration C (ppb) von Chlorpyrifos berechnet (CPF) in der Testlösung.
10.1.3 Da die Probe vorverdünnt wurde, muss die aus der Standardkurve erhaltene Konzentration der Probe mit ihrem Verdünnungsfaktor multipliziert werden.
10.2 Semiquantitative Bestimmung
10.1.1 Visuelle semiquantitative Bestimmung: Wählen Sie zunächst eine geeignete Standardlösung aus und führen Sie diese mit der Probe durch und beurteilen Sie anhand des Vergleichs der Extinktionswerte der ., ob der Probenkonzentrationswert kleiner oder größer als der Standardwert ist Probe und Norm.
10.1.2 Semiquantitative Messung des Gerätes: Zuerst eine geeignete Standardlösung auswählen und mit der Probe laufen lassen und anhand des Farbvergleichs der Probe beurteilen, ob der Probenkonzentrationswert kleiner oder größer als der Standardwert ist und die Norm.
11 Spezifität
Substanzkreuzreaktion
Chlorpyrifos (CPF) 100 %
12 Kit-Parameter
Die untere Nachweisgrenze dieses Kits beträgt 0,05 ppb. Der beste Absorptionswert von B0 sollte größer als 1,0 . sein
Der Fehler innerhalb der Extinktionsplatte des Kits beträgt weniger als 8 % und der Fehler zwischen den Platten beträgt weniger als 15 %. Die Wiederfindungsrate der in diesem Handbuch beschriebenen Methode zur Entnahme von Gewebeproben beträgt mehr als 80 %. 13
Der vom Kit bereitgestellte Standardkurvenbereich beträgt 0,1 ppb bis 8,1 ppb.
14 Analysebeschränkungen
Die mit diesem Kit positiv getesteten Proben sollten durch eine andere Methode wie HPLC oder GC/MS bestätigt werden.
